Pfu DNA Polymerase 高保真PCR的卓越选择

DNA聚合酶是分子生物学中不可或缺的工具,用于在实验室中进行DNA扩增和合成,如PCR等。其中,Pfu DNA Polymerase,简称Pfu酶,作为高保真DNA聚合酶的代表之一,具有许多优越的特性,下面将从多个方面介绍Pfu酶的特点及应用。

Pfu DNA Polymerase

1. 来源与基因改造

Pfu DNA Polymerase是从嗜热菌Pyrococcus furiosus中提取的DNA聚合酶。通过基因突变和重组改造,经过大肠杆菌表达纯化获得。这样的改造使得Pfu酶在热稳定性和扩增效率上远胜于野生型Pfu DNA聚合酶。其分子量为90kDa。

2. 高保真性与外切酶活性

Pfu DNA Polymerase具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性。由于具备3’至5’的外切酶活性,Pfu酶在PCR扩增过程中出错的几率大大降低,其保真性是传统Taq DNA聚合酶的10倍。相比其他高保真DNA聚合酶如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等,Pfu酶的出错率也更低,因此被广泛选用作高保真DNA聚合酶。

3. 扩增效率和速度

Pfu DNA聚合酶不仅保真性高,还具有高效率的扩增能力。其扩增效率高,扩增速度也相对较快(每分钟4 kb),这相较于普通Pfu酶的8倍速度,极大地缩短了反应时间。这弥补了普通Pfu酶在扩增效率和速度方面的不足。

Pfu DNA Polymerase KIT

4. 应用领域

Pfu酶在许多分子生物学实验中发挥着重要作用。主要的应用领域包括:

  • 高保真PCR: Pfu酶广泛应用于高保真PCR,能够高效且准确地扩增目标DNA片段。
  • 点突变: 由于Pfu酶的高保真性,它常被用于进行点突变实验,用于改变目标DNA序列的特定碱基。
  • 双平端PCR克隆: Pfu酶所扩增的DNA片段具有双平端性质,适用于双平端克隆方法,但不适用于常规的T载体克隆。

然而,值得注意的是,包含dUTP和dITP或含有这些核苷酸的引物不能在Pfu酶介导的PCR扩增反应中使用。

5. 质量控制与性能

Pfu DNA Polymerase经过严格的质量控制,纯度超过98%,并经过功能检测以确保其敏感性、特异性和可重复性。同时,该酶无外源核酸酶活性,不含外源内切、外切核酸酶污染,也不含表达宿主核酸残留。

6. 存储条件

为了保持其稳定性和活性,Pfu DNA Polymerase应在-20℃避光保存。若需要频繁使用,也可以分装后存放于4℃,但要避免多次冻融。解冻后需充分混匀,避免气泡的产生。

7. 实验结果展示

图1展示了Pfu酶在不同目的片段长度下的扩增效果,表明本产品能高效扩增不同长度的DNA片段。图2展示了Pfu酶对于不同模板量的大肠杆菌片段扩增灵敏度,从而展示了其在低模板情况下的优越性能。图3则描述了Pfu酶在不同延伸时间下对不同片段长度的扩增速度,展示了其快速扩增的能力。

在分子生物学领域,Pfu DNA Polymerase因其高保真性、高效率和稳定性被广泛用于各种实验和应用中,为科学研究提供了强有力的支持。

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