Taq DNA聚合酶解析:充分实现高效DNA扩增有力工具

Taq DNA聚合酶,通常简称为Taq酶,是目前最常用的DNA聚合酶之一,其来源于Thermus aquaticus这种热古菌,具有在高温下稳定活性的特点。在分子生物学领域,Taq酶在多种实验中发挥着重要作用。现在,我们来了解一下HCY™ Taq DNA聚合酶,它在野生型Taq酶的基础上,经过基因突变与重组改造,具有更高的热稳定性和扩增效率,为DNA扩增实验提供了更加可靠的工具。

Taq DNA Polymerase

基本信息

  1. 来源和改造:HCY™ Taq DNA聚合酶源自Thermus aquaticus,通过基因突变与重组改造获得。这使得它比野生型Taq DNA聚合酶更具热稳定性和扩增效率。其分子量为106 KD,是一种较大的酶分子。
  2. 活性特点:HCY™ Taq DNA聚合酶具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性,但不具备3’-5’外切酶活性。在PCR反应中,它的延伸速度最快可达5 kb/分钟,这意味着它能够迅速扩增DNA片段。
  3. 克隆优势:通过使用HCY™ Taq酶进行PCR反应,所得产物的3’端带有A碱基,这使得产物可以直接克隆于TA载体中。此外,也可以在末端平滑化和磷酸化后克隆到平滑末端载体。
  4. 活性定义:HCY™ Taq DNA聚合酶的活性定义是在74℃、30分钟内,以10 nmol的全核苷酸为模板,摄入产生酸性不溶物的活性。这一定义为1个活性单位(U)。

用途与适用范围

  1. PCR扩增:HCY™ Taq DNA聚合酶适用于PCR法扩增DNA。它能够扩增长度高达5 kb的DNA片段,特别适用于扩增3 kb以下的DNA片段。
  2. 克隆应用:由于产物的特性,大部分PCR产物的3’端附带“A”碱基,使其可以直接克隆到T-Vector中。同时,经过平滑化和磷酸化处理,也可以克隆到其他载体中。

性能介绍

片段长度扩增:HCY™ Taq DNA聚合酶在不同长度的DNA片段扩增中表现出色。无论是0.5 kb、1 kb、2 kb还是5 kb大小的目的片段,都能高效率地进行扩增。这说明它在各种片段的扩增实验中都表现出良好的效果。

灵敏度:在扩增大肠杆菌300 bp片段时,添加不同浓度的模板进行扩增,HCY™ Taq DNA聚合酶展现了很高的灵敏度。甚至可以将模板浓度降低至1 ng的水平进行扩增,这表明其在低模板量下也能可靠地进行扩增。

扩增速度:根据延伸时间的变化,HCY Taq DNA Polymerase在不同大小目的片段扩增中的速度表现得非常出色。在延伸时间为30秒和60秒时,分别能够高效扩增2 kb和5 kb的DNA片段。这证明在以λ DNA为模板的PCR反应体系中,其扩增速度可以达到每分钟5 kb。

质量控制

HCY™ Taq DNA聚合酶经过严格的质量控制,纯度大于98%。它经过PCR敏感性、特异性、可重复性的功能检测,不含外源核酸酶活性,也不受外源核酸酶污染。同时,它也不含表达宿主核酸残留。

使用与保存

该产品应长期存放于-20℃闭光保存,如需频繁使用,可分装后存放于4℃,避免反复冻融。解冻后应充分混匀,避免产生大量气泡,以保证其性能。

结论

HCY™ Taq DNA聚合酶作为一种经过基因改造的Recombinant Taq DNA Polymerases,为分子生物学实验中的PCR扩增提供了可靠高效的工具。其在不同长度片段的扩增、灵敏度和速度方面的表现,以及经过严格的质量控制,使其成为研究者们在DNA扩增领域的有力助手。

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